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用于「細(xì)胞和生物制品」及其生產(chǎn)過程中「支原體」污染的檢測(cè)

更新時(shí)間:2022-11-28  |  點(diǎn)擊率:756

支原體qPCR法介紹:

熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),簡(jiǎn)稱qPCR。

優(yōu)點(diǎn):

①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果

③檢測(cè)結(jié)果可定量

④操作簡(jiǎn)便

缺點(diǎn):

①對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)

②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體qPCR檢測(cè)試劑盒』介紹

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(均為探針法檢測(cè)),依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別, 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類試劑盒較其他廠家同類產(chǎn)品,具有以下的優(yōu)點(diǎn):

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據(jù)序列一致性,至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單,易于觀察。(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性,其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性,無交叉反應(yīng))

③高靈敏度,MB公司的經(jīng)典法試劑zui低檢測(cè)限可達(dá)到≤10CFU/ml。

MB公司的一步法qPCR試劑盒zui低檢測(cè)限≥50個(gè)基因組/反應(yīng)。

④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)品,便于方法學(xué)驗(yàn)證。

⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗(yàn)證。

⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于最后定量檢測(cè)。

 

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