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細(xì)胞細(xì)菌污染癥狀及處理方法

更新時間:2023-10-02  |  點擊率:665

細(xì)菌污染是生物實驗室,在培養(yǎng)細(xì)胞的過程,常見的問題之一,會直接引起細(xì)胞死亡,影響實驗進(jìn)度。本期內(nèi)容,我們匯總了細(xì)菌污染的癥狀,并分別給出了應(yīng)對方法。

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物,一般為微米級別。細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細(xì)胞發(fā)生細(xì)菌污染后,有哪些癥狀?與其他污染相比,細(xì)菌污染在細(xì)胞培養(yǎng)過程中“發(fā)病"更為迅速,較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為:
細(xì)胞培養(yǎng)液短期內(nèi)變黃且渾濁(大量酸性物質(zhì)累積);
靜置的培養(yǎng)液時不渾濁,但稍加震蕩,就有許多渾濁物漂起;
可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂?。?/span>
細(xì)胞停止生長并有中毒表現(xiàn),后出現(xiàn)大量死亡;

如何用實驗來驗證,細(xì)胞是否被細(xì)菌污染?常見的染色法、培養(yǎng)法以及PCR方法都可以對細(xì)菌污染進(jìn)行檢測。
如果只需要初步判定細(xì)胞是否被污染,課選擇涂片染色或培養(yǎng)法對樣品進(jìn)行檢測。
例如:革蘭氏染色法會使陽性菌呈現(xiàn)紫色,陰性菌呈現(xiàn)紅色;向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液,37 ℃培養(yǎng),培養(yǎng)基變渾濁;專業(yè)的PCR檢測:以Minerva Biolabs公司的細(xì)菌PCR檢測試劑盒(Onar® Bacteria Detection Kit,貨號:12-1025)為例:
該試劑盒采用PCR方法,用于檢測生物樣品(包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液)中是否存在細(xì)菌。根據(jù)序列分析,該試劑盒可檢測超過45種細(xì)菌屬,其中含污染細(xì)胞的常見菌屬:


如果細(xì)胞不幸遭遇到了細(xì)菌污染的侵襲,該如何應(yīng)對呢?對于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)物而言,發(fā)生細(xì)菌污染,建議直接將培養(yǎng)物丟棄,并對環(huán)境進(jìn)行消殺,紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺等。
對于重要且污染相對較輕的細(xì)胞:一般用抗生素的常用量的 5-10 倍作沖擊療法,用藥 24-48 小時后再換常規(guī)培養(yǎng)液,但需要需要注意的是:一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以清除干凈,有的抗生素只有抑菌作用而無殺菌效應(yīng)。且有研究表明,大量使用抗生素,或?qū)?xì)胞基因組產(chǎn)生影響,該種處理方法屬于“殺敵一千,自損八百",因此不做推薦。

因此,防范大于治療,在細(xì)胞實驗過程中,我們不希望看到任何微生物污染的情況發(fā)生。為了避免浪費有限的精力和經(jīng)費,應(yīng)優(yōu)先預(yù)防污染的發(fā)生。實驗前穿戴好防護(hù)用具,既是保護(hù)自己,也是保護(hù)實驗材料;定期對實驗環(huán)境進(jìn)行清潔消毒,也能有效預(yù)防微生物污染的發(fā)生。

使用專業(yè)的支原體祛除試劑,更加高效、安全和便捷。實驗空間中的墻壁、實驗臺、桌椅板凳、顯微鏡、冰箱、離心機等設(shè)備和儀器,可使用Mycoplasma-off™或Mycoplasma-off™ Wipes對其進(jìn)行噴涂或擦拭,清除表面的多種微生物污染。對于水浴鍋、培養(yǎng)箱水槽等環(huán)境,可以選擇Water Shield™對其進(jìn)行處理。講產(chǎn)品按比例直接加入水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽中,可預(yù)防微生物污染。

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