貼壁細(xì)胞作為生物醫(yī)學(xué)研究中常用的一種細(xì)胞類型，在實(shí)驗(yàn)室中扮演著重要的角色。然而，支原體污染可能會對貼壁細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響。本文將介紹如何判斷貼壁細(xì)胞是否被支原體污染、污染后的處理方法以及預(yù)防措施。

判斷貼壁細(xì)胞是否被支原體污染

1. 細(xì)胞形態(tài)觀察

一般情況下，支原體污染的早期，通過顯微鏡難以觀察到貼壁細(xì)胞有明顯變化。支原體污染的中后期，可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)異常，如形態(tài)不規(guī)則、大小不一、培養(yǎng)液提前變黃、細(xì)胞大量漂浮、細(xì)胞活力下降等現(xiàn)象。

2. PCR檢測

使用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)檢測細(xì)胞中是否存在支原體DNA。PCR是一種高度敏感的方法，可用于檢測微量的支原體。

處理支原體污染的貼壁細(xì)胞

1. 隔離受污染細(xì)胞

首先，需要將被支原體污染的細(xì)胞與其他無污染的細(xì)胞進(jìn)行隔離，防止污染的擴(kuò)散。

2. 清潔和消毒

清潔受污染的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)器具和工作臺，使用有效的消毒劑，如德國MB公司的Mycoplasma off支原體清除噴霧劑。

3. 處理污染細(xì)胞

如果貼壁細(xì)胞已經(jīng)被污染，需要停止使用這些細(xì)胞并盡早處理。如果是不能隨意丟棄的細(xì)胞，可使用Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑對細(xì)胞中的支原體進(jìn)行清除。

4. 檢查其他細(xì)胞系

檢查實(shí)驗(yàn)室中其他細(xì)胞系是否也存在支原體污染，以防止污染傳播。

預(yù)防貼壁細(xì)胞支原體污染

1. 嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范

在無菌條件下操作。

定期清潔和消毒實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作區(qū)域。

避免直接接觸可能污染的物品，如培養(yǎng)皿、試劑瓶等。

2. 使用無菌技術(shù)

使用經(jīng)過驗(yàn)證的無菌技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、傳代和操作。

使用無菌的培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基。

3. 定期檢測

定期對貼壁細(xì)胞進(jìn)行支原體污染的檢測，及時發(fā)現(xiàn)并處理。

建立規(guī)范的檢測流程，包括PCR、免疫染色等方法。

貼壁細(xì)胞的支原體污染可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果和研究產(chǎn)生嚴(yán)重影響，因此及時識別、處理和預(yù)防支原體污染是至關(guān)重要的。只有確保細(xì)胞的無菌狀態(tài)，才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，進(jìn)而推動科研工作的順利進(jìn)行。

通過以上的方法和注意事項，希望可以幫助研究人員更好地管理和保護(hù)貼壁細(xì)胞，確保其在實(shí)驗(yàn)室中的健康和純凈狀態(tài)。